10x Visium HD空间表达芯片设有两个6.5mm*6.5mm捕获区,这些捕获区周围配有基准框架用于图像的对准。捕获区由2*2 μm方格组成,每个单元密集排列着数百万空间条形码寡核苷酸探针,使得可以无间隙、无偏地捕获样本全基因表达信息,从而实现单细胞级分辨率。在进行生信分析时,官方建议采用8*8 μm为基本分析单元,也可根据细胞大小或研究目的进行调整,如10*10 μm或16*16 μm等,以满足多样化的研究场景。
图片源于10x Genomics官方
目前,安诺优达已成功完成几十例样本的10x Visium HD实验,整体流程运行稳定。我们再次分享部分实测数据,大家一起品品10x Visium HD的卓越性能~
以其中一例数据为例,该切片组织的测序数据量为263M Reads,测序饱和度为32.1%。人类panel在该组织中实际鉴定到18,029个基因。共得到337,571个8*8 μm的bin单元;每个8*8μm bin squares鉴定到的平均reads数为780.2个,每个Bin鉴定到的平均UMI数为451.9个,每个Bin平均检测到的基因数为321.2个;以16*16 μm的bin为单位,每个 Bin 平均鉴定到的 UMI 数为1790.7个,基因中位数为1039。
这些指标均达到预期,展示了高质量的数据产出,证明了安诺优达稳定的实验质量。
FFPE样本在DV200质检达标后,就可以开始正式实验了。组织切片经H&E染色确认目标结构后,将全转录组探针与组织中的靶点进行杂交和连接。接着,通过CytAssist仪器将这些探针从组织切片转移到10x Visium HD玻片上,玻片再经PCR仪进行探针的延伸。之后,回收探针,进行预扩增、文库构建及测序,最终实现数据可视化。
图片源于10x Genomics官方
安诺优达拥有完善的空转实验流程,并已成功交付包括人、鼠、猴、猪、羊、牛、鸡、斑马鱼等物种的60+组织的数据。
数据分析可以借助Space Ranger和Loupe Browser对10x Visium HD数据进行初步分析。Space Ranger可以将原始fastq数据转换为基因表达矩阵,用于后续的生物信息数据挖掘,同时可将空间基因表达信息与组织图像相结合,实现对空间基因表达信息的可视化。
还可以使用Loupe Browser进一步探索和分析10x Visium HD数据(官网demo),同时兼容R和Python构建的生态系统,用于更个性化的自定义分析。
图片源于10x Genomics官方
安诺优达依据当前高分文章及老师们的个性化分析需求,已开发54+单细胞空间多组学分析模块,涵盖从质控到深层机制解析,旨在为老师们的研究提供强有力的技术支持,加速科研进展,助力科研事业攀登新的高峰。
安诺优达单细胞个性化分析模块
安诺优达空间个性化分析模块