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建库测序是指对合作伙伴提供的合格样品(DNA或RNA)进行文库构建或合作伙伴提供文库样品,文库质检合格后使用illumina高通量测序平台进行测序,进而产出高质量的测序数据。


优势


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技术流程


二代建库测序技术流程

测序类型


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样本要求

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HiSeq X Ten PE150测序

       HiSeq X Ten平台由10台HiSeq X超高通量测序仪组成,单次运行即可获得18Tb数据,首次打破了人类全基因组测序的1000美元门槛。生产通量强大高效,以其无可匹敌的速度和通量,为群体规模的人类全基因组测序提供了一个理想的方案。

  • 数据量

       以下统计了安诺近期的HiSeq X Ten PE150 300条lane数据产出,这300条lane的文库是碱基平衡文库,从数据统计结果可以看出,平均每条lane数据产出148.6 Gb,每条lane的数据产出大于130 Gb的比例是95.7%,远远超出Illumina官方指标。

HiSeq X Ten PE150测序数据统计


  • 数据质量

       以下测序统计显示,HiSeq X Ten PE150测序数据平均Q30在90%以上,在碱基准确度、测序均一性、可用数据比例等方面均表现卓越。


HiSeq X Ten PE150测序数据统计

下机数据SAV图


NextSeq 550AR SE50测序

       NextSeq 550AR基因测序仪(国械注准:20173400330)是安诺优达与美国Illumina公司合作开发的新一代桌面式高通量基因测序仪,由安诺优达在中国进行研发生产、应用开发以及注册报批,该设备也是目前全球临床基因测序仪的最先进机型,为临床检测及科研项目提供了最佳选择。

  • 数据量

       以下统计了安诺近期的NextSeq 550AR PE50 50个FC(Flow Cell,流动槽)数据产出,从数据统计结果可以看出,平均每个FC数据产出459.6 M reads,远远超出Illumina官方指标。


NextSeq 550AR PE50测序数据统计

  • 数据质量

     以下测序统计显示,NextSeq 550AR PE50测序数据平均Q30在92%以上,测序快速高效。


建库测序 案例分析-5.png

下机数据SAV图


NovaSeq 6000 PE150 测序

NovaSeq 6000系统充分整合了illumina 台式测序仪成熟技术,是目前最先进的高通量测序仪,其测序通量更高、测序周期更短、测序单价更低,适用于包括全基因组、外显子、转录组、表观类、单细胞类等几乎所有文库类型的测序。

  • 数据量

以下统计了安诺近期NovaSeq 6000 S4 PE150 50张Flow Cell(200条lane)碱基平衡文库的数据产出,从数据统计结果可以看出,平均每张Flow Cell数据产出3.73Tb,平均每条lane数据产出932.4Gb,远超出Illumina官方指标。

NovaSeq 600 S4 PE150测序数据统计

  • 数据质量

以下测序统计显示,NovaSeq 6000 S4 PE150测序数据平均Q30在90%以上。

NovaSeq 6000 S4 PE150测序数据统计

下机数据SAV图

Q HiSeq X测序仪参数


AHiSeq X测序仪参数


Q NovaSeq 6000测序仪S4试剂参数


A

NovaSeq 6000测序仪S4试剂参数



Q 文库样品测序有哪些注意事项?


A

(1)文库结构需符合Illumina上机要求;

2)对于合作伙伴自建库,请按照如下标准递送样本:

a. 为了防止样品丢失和转管带来的样品损失,需要将文库置于1.5ml离心管中存储,并用封口膜封好;

b. 文库体积需要多于10μl。



Q 样品质检流程是怎样的?


A

(1)DNA样品: Nanodrop® 2000 分光光度计检测 → Qubit® 3.0 Flurometer检测 → 琼脂糖凝胶电泳检测;

(2)RNA样品: Nanodrop® 2000分光光度计检测→琼脂糖凝胶电泳检测→Agilent 2100检测;

(3)文库样品: Agilent 2100检测 → StepOnePlus™ Real-Time PCR System检测。



Q 文库pooling的原则


A 不同文库按照有效浓度及目标下机数据量的需求 pooling。